Em cromatografia líquida, muitas decisões são tomadas sem pensar duas vezes. Partimos do princípio de que tudo dará certo porque usamos bons solventes , temos uma coluna nova e o método está otimizado. Mas... você verificou o injetor recentemente?
Esse gesto simples — injetar a amostra — pode ser a origem de mais problemas do que você imagina.
O que diz o cromatograma
Picos divididos, largos ou com altura variável. Ruído de fundo. Reprodutibilidade irregular. Se você já descartou problemas com a coluna ou os solventes, é hora de examinar o injetor e tudo ao seu redor: da agulha à alça de amostragem, incluindo a forma como você prepara e manuseia a amostra.
E não estamos falando apenas de problemas mecânicos, como vazamentos ou capilares obstruídos. Existem outros erros, menos visíveis, mas igualmente críticos.
Os fatores que fazem a diferença
- Dissolva bem… e no solvente correto.
Idealmente, sua amostra deve ser dissolvida na mesma fase móvel que passa pela coluna no momento da injeção. Se isso não for possível, certifique-se de que o solvente seja menos forte que a fase móvel. Um solvente com baixa força eluotrópica é recomendado. - superior pode alterar completamente o perfil cromatográfico.
- Limpeza externa da agulha: não é um capricho.
Em amostradores automáticos, a limpeza interna da agulha geralmente é garantida. No entanto, a parte externa, especialmente com amostras viscosas ou de alta concentração, também requer atenção. A solução? Utilize frascos de enxágue apropriados para imergir a agulha entre as injeções e evitar a contaminação cruzada. - Amostra filtrada = sistema satisfeito
Não corra riscos: sempre filtre. Use filtros de seringa de 0,45 µm para HPLC convencional ou de 0,2 µm para UHPLC. Isso evita o entupimento da agulha e da frita da coluna. - Evite retirar a amostra do fundo do frasco.
Sedimentos invisíveis se acumulam ali. Se você os perturbar, poderá injetar partículas que comprometam sua análise... e seu sistema. - Sistema com pressão excessiva? Pode ser problema no injetor.
Vedações desgastadas, capilares obstruídos por detritos, válvulas defeituosas… Às vezes, a alta pressão não vem da coluna de injeção, mas do próprio injetor. Verifique o estado das peças mecânicas e não hesite em substituir qualquer componente danificado.
